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各种细胞免疫检测方法比较

发表于:2008-7-25 12:00:25    点击率:3670

类型

检测名称

检测方法

主要特点

体内功能检验

迟发型超敏反应法

皮下注射抗原或者负载抗原的dc,观察红斑、硬块的发生与大小

优点:体内功能性检验,相对比较容易操作;

缺点:只是一种初筛,加阳性与假阴性比较严重。

体外表型检测

tcr可变区分析法

使用针对t细胞受体(tcr)可变区的流式抗体来对表达特定可变区的t细胞计数

优点:可以提供关于可变区使用的群体分布;

缺点:识别同一种抗原的tcr的可变区可能不相同;单抗不够丰富,不能检测所有种类的可变区。

多肽mhc五聚体法(tetramer)

用荧光标记的mhc-肽五聚体去结合t细胞,进而做流式分析

优点:能做精细分析,灵敏较高;

缺点:只能分析mhc-i类分子,四聚体制备复杂,成本高昂,需要预先合成t细胞表位肽。

tcr cdr3序列分析

pcr的方法扩增t细胞受体互补决定区3的序列,测序

特点:简单灵敏,但还不能用于群体分析;

该方法目前刚刚开展,还不能全面评价。

体外功能检测

细胞因子elispot

抗原与待测pbmc混合,通过elispot检测阳性细胞频率

优点:灵敏度最高,单细胞水平,特异性强,结果直观可信,成本低,高通量;

缺点:血液pbmc的分离还未实现自动化;还有待于发展双因子、多因子elispot技术。

淋巴细胞增殖试验(3h胸苷掺入法)

待测pbmc、辐射过的apc、抗原混合孵育,特异性的t细胞增殖,通过掺入的3h胸苷来确定增殖水平

 

优点:是传统方法,研究比较透彻;

缺点:需要放射性操作,非特异性反应比较强,并且灵敏度低。

细胞内细胞因子染色法

抗原与待测pbmc混合,把细胞因子保留在细胞内,然后用流式抗体染色、计数

优点:单细胞水平,可以同时检测多个参数、多种因子;

缺点:操作复杂,灵敏度相对较低,容易出现假阳性。

细胞因子elisa

抗原与待测pbmc混合,然后用定量elisa法测量细胞受刺激而分泌到上清液中的细胞因子浓度

 

优点:特异性强,可以对细胞因子浓度定量,有以全血作为检测样品的潜力;

缺点:只能做群体水平检测,灵敏度不够高。

细胞因子mrna定量法

通过定量rt-pcr方法检测受刺激的细胞中细胞因子mrna的水平

 

优点:有利用各种组织样品的潜力,灵敏度高,高通量;

缺点:容易出现假阳性,只能做群体水平检测。

ctl杀伤法(51cr释放法)

制备51cr标记的表达抗原的靶细胞,与待测pbmc混合,通过51cr释放来确定靶细胞被杀伤的水平

优点:最直接的功能性检测;

缺点:靶细胞制备困难,试验周期长,需要放射性操作,灵敏度低。

极限稀释计数ctl

待测pbmc稀释到一系列孔中,体外增殖,然后加入靶细胞判定每孔裂解的阴阳性,最后通过泊松统计法确定ctl极限稀释倍数

优点:对ctl的频率计数比直接ctl杀伤法更准确,灵敏度也有所提高;

缺点:实验及其复杂,工作量极大,并且因为有些ctl前体细胞不能增值而导致结果偏低。

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