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Q&A RNA提取常见问题分析

发表于:2010-11-19 9:03:08    点击率:3389

q 柱子堵塞

  a-1 裂解或匀浆处理不彻底

      ——减少样品使用量,增加裂解液用量,增加匀浆和裂解时间。

  a-2 处理样品太多

      ——减少样品使用量或加大裂解液用量。

q 得率低

  a-1 裂解或匀浆处理不彻底

      ——减少样品使用量,增加裂解液用量,增加匀浆和裂解时间。

  a-2 处理样品太多

      ——请参考最大处理量。

  a-3 rna仍在柱上未洗出

      ——加入rnase-free水后,放置几分钟再离心。

  a-4 洗出液中含有乙醇

      ——漂洗后应再次离心,尽量去除漂洗液。

  a-5 未除净细胞培养液

      ——收集细胞时,请注意尽量去除培养液。

  a-6 使用rnastore保存的细胞,未有效离心

      ——rnastore密度大于一般的细胞培养液,离心时应加大离心力。可以3000×g离心。

  a-7 样本rna本身含量低,丰度低

      ——提取阳性样本,确定是否为样本原因。

q rna降解

  a-1 提取的材料不新鲜

      ——新鲜组织取得后应立即置于液氮中或立即放入rnastore试剂中,以保证提取效果。

  a-2 处理样品量过大

      ——减少样品使用量。

  a-3 污染了rnase

      ——虽然试剂盒中提供的缓冲液都不含rnase,但使用过程中很容易污染rnase,应小心操作。

  a-4 电泳污染

      ——更换缓冲液,使耗材,loading bufferrnase污染。

  a-5 电泳时上样量太大

      ——减少上样量,每孔上样量不超过2微克。

q dna污染

  a-1 处理样品量过大

      ——减少样品使用量。

  a-2 有些样品本身dna含量较高,可使用dnase处理。

      ——得到的rna溶液可加入rnase-free dnase处理,处理后可直接用于后续实验,也可用本试剂盒再进行一次纯化。

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